金花葵和葵花叶提取物的亚硝酸盐清除能力

1 引言 
  金花葵(Aurea helianthu),又名菜芙蓉,也称野芙蓉。金花葵具有良好的清热解毒、镇痛消炎、降血脂、免疫调节、抑制肿瘤细胞、抗氧化、抗衰老等作用,具备很强的药用价值。 
  2 实验目的 
  本实验使用的葵花叶提取物是来自于向日葵的葵花叶提取物,向日葵是菊科向日葵属的一年生草本植物,向日葵的叶分为真叶和子叶。茎下部分叶片在开花前制造养分,主要供给根部生长,到开花时其功能基本结束。中上部叶片制造的养分主要供给花盘促使种子形成,葵花叶中含有多糖及多种微量元素,营养丰富,利用价值很高。[1] 
  维生素C,英文名Vitamin C,又称L-抗坏血酸,是多数生物的必需营养素??够笛嵩诙嗍锾迥诳梢越柚鲁麓恢圃於?,人类例外。在生物体内,抗坏血酸是一种抗氧化剂,其作用是?;せ迕庥谧杂苫纳撕?。维生素C有两种异构体,分别为L-型和D-型,只有L-型的異构体才具备一定的生理功能,还原型和氧化型都有生理活性[2]。维生素C的主要功能有:① 还原作用,维持巯基酶的活性、促进铁的吸收、促进四氢叶酸形成、促进抗体形成;②参与羟化反应,促进有机物或毒物羟化解毒、促进类固醇羟化、促进神经递质(5-羟色胺及去甲肾上腺素)合成;③其他功能:解毒、预防癌症、清除自由基。[3] 
  3 实验过程 
  金花葵提取物和葵花叶提取物含有丰富的多糖成分,由目前研究证明,多糖对NaNO2具有一定的清除作用,亚硝酸钠是一种食品添加剂,主要用于腌制肉食类食品,其可以保持食品鲜艳的色泽,抑制肉毒芽孢杆菌。但是,当亚硝酸盐进入人体后,会与磷脂、氨基酸等有机物质发生胺类反应,该反应可生成具有强烈致癌作用的亚硝胺。因此,亚硝酸钠可以说是一种潜在的致癌物质,那么对它的清除作用的研究也显得尤为重要[4-5]。苯酚-硫酸法[6-7]是常用的测定多糖含量的方法,本实验也是利用此方法来测定两种提取物中的多糖含量。此外,本实验也测定了金花葵提取物、葵花叶提取物中的多糖对NaNO2的清除作用,其测定原理是:多糖可将NaNO2氧化消耗,而未参与反应的亚硝酸根在弱酸性环境下,可使对氨基苯磺酸重氮化,再与盐酸α-奈胺偶合生成红色偶联化合物,通过测定该溶液吸光度,即可计算出多糖对NaNO2的清除率。
①实验材料。金花葵花,来自延吉郊区;葵花叶,采自龙井郊区。 
 ?、谑笛橐瞧?。紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司),电子分析天平(上海精天电子仪器有限公司)。 
 ?、凼笛槭约?。NaNO2;柠檬酸钠缓冲液;0.4%对氨基苯磺酸;0.2%盐酸α-奈胺。 
 ?、苁笛榉椒?。 
  金花葵提取液:配制成浓度为1mg/ml溶液备用。 
  葵花叶提取液:配制成20mg/ml的溶液,摇匀,静置。使用时,吸取上清液1ml,加入9ml蒸馏水稀释为2mg/ml的溶液。 
  抗坏血酸溶液:配制成500μg/ml抗坏血酸溶液备用,用时稀释成100μg/ml。 
  葡萄糖标准液配制成浓度为0.04mg/ml的葡萄糖标准溶液。 
  0.1%NaNO2溶液(用时稀释100倍)。 
  0.5mol/L柠檬酸钠缓冲液(pH=3): 配制成0.5mol/L柠檬酸钠溶液;配制成0.5mol/L柠檬酸溶液;按1.4mL:18.6mL的比例混合,摇匀,得到0.5mol/L柠檬酸钠缓冲液(PH=3)。 
 ?、荼曜记叩闹票?。分别吸0.0ml,0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml, 1.0ml,1.2ml,1.4ml,1.6ml的0.04mg/ml的葡萄糖标准液,置于5ml的试管中,加水补足到2ml,加入0.2ml 6%苯酚,震荡混匀后,快速滴加浓硫酸1ml,静置5min后,置于沸水浴中加热15~20min,取出,迅速冷却至室温,于波长490nm处测吸光度。 
 ?、扪分卸嗵呛康牟舛?。按照上述标准曲线制作过程,分别对金花葵提取物及葵花叶提取物中的多糖含量进行测定,通过测定样品液的吸光度,根据标准曲线计算出样品中多糖含量。 
 ?、逳aNO2清除率的测定。提取物及抗坏血酸对NaNO2的清除率的测定:取6支试管,按下表加入试剂。加入试剂后,摇匀,置于37°C恒温水浴中加热1h后取出。从6支试管中分别吸取0.75ml溶液,置于洁净试管中,并加入1.5ml 0.4%对氨基苯磺酸、0.75ml 0.2%盐酸α-奈胺,摇匀,暗处放置15min后,在波长540nm处测定吸光度值。 NaNO2的清除率的计算公式: 清除率(%)=(A对照-A样品)/A对照x100% 
  4 實验结果 
  4.1 样品多糖含量的测定 
  按上述多糖含量测定方法,分别对金花葵提取物和葵花叶提取物同时测定三次吸光度,金花葵提取物吸光值分别为0.126,0.123,0.125,葵花叶提取物的吸光值分别为0.117,0.118,0.114。根据计算得,金花葵提取物中多糖的平均含量为14.2%,葵花叶提取物中多糖的平均含量为13.3%。 
  4.2 标准曲线回归方程的建立 
  用紫外分光光度计在波长为490nm处测定1.2.3中各反应后溶液吸光度,试管1为对照组,得到线性回归方程为:Y=1.575X+0.0115,R2=0.9881,说明葡萄糖在0.004mg/ml-0.032mg/ml范围内很好地符合朗白-比尔定律。 
  4.3 金花葵提取物溶液对NaNO2的清除作用 
  第一,根据吸光度计算样品溶液对NaNO2的清除作用,在0.2~1.0mg/ml范围内,金花葵提取物对NaNO2有一定的清除作用,且清除率随着浓度的增加而增大。样品浓度与清除率存在良好的线性关系,计算出其50%抑制浓度IC50=0.71mg/ml。第二, 葵花叶提取物溶液对NaNO2的清除作用。根据吸光度计算样品溶液对对NaNO2的清除作用,在0.4~2.0mg/ml范围内,葵花叶提取物对NaNO2有一定的清除作用,且清除率随着浓度的增加而增大。样品浓度与清除率存在良好的线性关系,计算出其50%抑制浓度IC50=1.5mg/ml。第三, 抗坏血酸对NaNO2的清除作用。根据吸光度计算样品溶液对NaNO2的清除作用,在10~100μg/ml范围内,抗坏血酸对NaNO2有一定的清除作用,且清除率随着浓度的增加而增大。样品浓度与清除率存在良好的线性关系,计算出其50%抑制浓度IC50=0.053mg/ml。 
  5 结论 
  通过实验测出金花葵提取物中多糖含量占14.2%,葵花叶提取物中的占13.3%。此外,金花葵提取物、葵花叶提取物和抗坏血酸都对NaNO2具有一定的清除作用,三者IC50分别为0.71mg/ml、1.5mg/ml、0.053mg/ml,即对NaNO2的清除作用:抗坏血酸>金花葵提取物>葵花叶提取物。 
  【参考文献】 
  【1】索金玲.向日葵花盘中有效化学成分分析及抗氧化性测定[D]. 乌鲁木齐:新疆大学,2013. 
  【2】汪东风.食品化学[J].北京:化学工业出版社,2009(10):123-125. 
  【3】葛可佑.公共营养师 基础知识[M].北京:中国劳动社会保障出版社,2013. 
  【4】丁晓雯,刘春红.食品安全学[M].北京:中国农业出版社,2011. 
  【5】刘宁,沈明浩.食品毒理学[M].北京:中国轻工业出版社,2007. 
  【6】余晓雷,张可,郑旭霞.芦荟中多糖含量测定方法的探讨[J].营养学报,2003(7):149-152. 
  【7】聂国朝.中药木瓜多糖的提取分离及含量测定[J].微量元素与健康研究,2003(5):30-38.
浏览次数:  更新时间:2017-09-29 17:04:59
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